Ekspresi gen protein selubung Tomato infectious chlorosis virus pada Escherichia coli

F Kurniawati, G Suastika - Jurnal Hama dan Penyakit …, 2015 - jhpttropika.fp.unila.ac.id
F Kurniawati, G Suastika
Jurnal Hama dan Penyakit Tumbuhan Tropika, 2015jhpttropika.fp.unila.ac.id
Ekspresi gen protein selubung tomato infectious chlorosis virus pada Escherichia coli.
Penyakit klorosis pada tanaman tomat disebabkan oleh Tomato infectious chlorosis virus
(TICV). Deteksi TICV dapat dilakukan dengan transkripsi balik (RTPCR) dan serologi. Titer
TICV dalam jaringan tanaman sangat rendah karena terbatas pada jaringan floem. Deteksi
serologi membutuhkan antiserum. Di Indonesia antiserum TICV ini belum tersedia. Usaha
penyediaan antigen melalui kloning dan ekspresi gen protein selubung (CP) merupakan …
Abstrak
Ekspresi gen protein selubung tomato infectious chlorosis virus pada Escherichia coli. Penyakit klorosis pada tanaman tomat disebabkan oleh Tomato infectious chlorosis virus (TICV). Deteksi TICV dapat dilakukan dengan transkripsi balik (RTPCR) dan serologi. Titer TICV dalam jaringan tanaman sangat rendah karena terbatas pada jaringan floem. Deteksi serologi membutuhkan antiserum. Di Indonesia antiserum TICV ini belum tersedia. Usaha penyediaan antigen melalui kloning dan ekspresi gen protein selubung (CP) merupakan salah satu cara yang menjanjikan dalam produksi antiserum. Penelitian ini bertujuan untuk mengekspresikan gen CP TICV sebagai antigen dalam produksi antiserum. Gen CP diamplifikasi dengan transkripsi balik (RT-PCR) dari RNA total yang diekstraksi dari daun yang terinfeksi yang berasal dari Cipanas, Kabupaten Cianjur, Jawa Barat. Gen CP hasil amplifikasi kemudian di sekuensing, disubkloning ke dalam vektor ekspresi pET 21b, ditransformasi ke dalam bakteri Escherichia coli strain BL21 DE3 (pLysS) dan diekspresikan dengan diinduksi menggunakan IPTG 1 mM selama semalaman pada suhu 37 C. Purifikasi CP yang mengandung 6xhistag dengan menggunakan NiNTAspin column dan hasilnya dikonfirmasi dengan sodium deodecyl sulphate polyacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Hasil amplifikasi gen CP berhasil memperoleh fragmen gen CP yang berukuran 750 pb dan diekspresikan pada vektor pET 21b. Purifikasi CP yang mengandung 6xhistag menggunakan NiNTA spin column berhasil memperoleh pita CP yang berukuran sekitar 29 kDa.
jhpttropika.fp.unila.ac.id
以上显示的是最相近的搜索结果。 查看全部搜索结果